β-galactosidase Lactose glucose + galactose La recherche de cette enzyme ne se fait qu'à partir d'un milieu lactosé (exemple: milieu Kligler-Hajna). En effet, l'enzyme n'est synthétisée qu'en présence de lactose dans le milieu (enzyme inductible). La recherche ne présente d'intérêt que dans le cas de bactéries lactose En effet, toutes les bactéries lactose+ sont β-galactosidase la recherche de l'enzyme est donc inutile. On utilise pour sa recherche un substrat synthétique, l'ONPG ortho-nitro-phénylgalactoside). VI-4- Mise en évidence de l'assimilation d'un substrat carboné Exemple: milieu Citrate de Simmons. ] Cette recherche s'effectue à partir du milieu Clark et Lubs. RECHERCHE DE LA VOIE D ATTAQUE DU GLUCOSE : définition de RECHERCHE DE LA VOIE D ATTAQUE DU GLUCOSE et synonymes de RECHERCHE DE LA VOIE D ATTAQUE DU GLUCOSE (français). VI- Autres tests de mise en évidence d'un glucide VI-1- Mise en évidence de la disparition d'un polyholoside Exemple: la dégradation de l'amidon est recherchée sur milieu gélosé à l'amidon. L'attaque de l'amidon est mise en évidence par la disparition de la coloration caractéristique dans la gélose. VI-2- Mise en évidence de l'apparition d'un produit: l'esculétine L'esculine est un hétéroside qui par hydrolyse libère du glucose utilisé par les bactéries et de l'esculétine qui donne un précipité noie en présence de fer. ]
Un article de Wikipédia, l'encyclopédie libre. Cette technique permet la détermination du métabolisme oxydation ou fermentatif de la bactérie, autrement dit: dégrade-t-elle le glucose via le cycle de Krebs ou utilise-t-elle une autre voie? Sommaire 1 Principe 2 Composition du milieu de Hugh et Leifson 3 Technique 4 Lecture 5 Précisions 6 Voir Aussi [ modifier] Principe Dans le milieu Hugh et Leifson auquel on ajoute du glucose, on cherche le métabolisme de la bactérie. Le milieu est régénéré (il a été maintenu en surfusion pour que les gaz dissous dans le milieu s'en échappent). Il possède donc un gradient de concentration en O 2 (l'O 2 est plus abondant en surface qu'en profondeur). Voie d attaque du glucose en. Les bactéries qui utilisent le glucose produisent des acides. La visualisation des productions d'acide est indiquée par le changement de couleur du BBT, indicateur coloré de pH contenu dans le milieu. A la fin de l'incubation, on observe le changement de couleur du milieu pour déterminer le type oxydatif ou fermentatif.
Le métabolisme glucidique correspond à l'ensemble des réactions, qui font intervenir les glucides en tant que substrats. Un glucide est une molécule organique composée d'atomes de H et O. Il existe plusieurs sortes de glucides: Type de molécule Oses glucide simple = directement assimilable Nom Glucose Exemples de milieux contenant le glucide Hugh et Leifson, VF Galactose Fructose. Diholosides ou disaccharides = glucide dont l'hydrolyse libère 2 oses Lactose = galactose + glucose Lactose: BCP, Drigalski, Mac Conkey, Hajna-Kligler Saccharose = glucose + fructose Maltose = 2 glucoses Polyosides ou polysaccharides = glucide dont l'hydrolyse libère n oses Amidon = n glucose Gélose à l'amidon Hétéroside = ose + substance non glucidique Esculine Gélose à l'esculine, milieu BEA. [... ] [... ] Les glucides sont dégradés par la cellule dans le but de fournir de l'énergie (ATP) et des éléments de base pour les synthèses bactériennes. Voie d attaque du glucose c. II- Métabolisme des glucides: mise en évidence de l'utilisation des glucides L'utilisation d'un glucide dans un milieu de culture peut être mis en évidence: par une acidification révélée par un indicateur de pH; par la présence d'un produit formé ou la disparition d'un substrat de départ; par la présence d'une enzyme intervenant dans le métabolisme glucidique. ]
Les bactéries sont oxydatives. 3 Tubes O et F entièrement jaunes → il y a eu virage de l'indicateur coloré à cause de la production d'acide dans tout le tube: les bactéries ont utilisé le glucose en présence et en absence d'oxygène. Les bactéries sont donc fermentatives. Lecture du milieu Hugh & Leifson - Fiche de lecture - Calme86. 4 Haut du tube O bleu → bactéries inertes au glucose: utilisation des peptides comme source d'énergie. Précisions [ modifier | modifier le code] Le type oxydatif ou fermentatif est étroitement lié avec le type respiratoire de la bactérie. On peut donc vérifier la cohérence des résultats avec le milieu viande-foie. Voir aussi [ modifier | modifier le code] Recherche du type respiratoire Portail de la biologie
- souche 2: observation de bactéries polymorphes, certaines sous forme de bâtonnets très courts, d'autres presques ovalaires, roses avec coloration bipolaire, se déplaçant lentement de façon sinueuse. Microbiologie de l'ETSL - Voie d'attaque du glucose. Interpréter les observations faites pour chacun des souches testées 2. Lecture de l'isolement réalisé sur GNO (ou GTS pour Gélose Trpypticase Soja soit TSA pour Trypticase Soy agar en anglais) milieu non sélectif sur lequel l'isolement est réalisé en dernier en jour 1) Conditions d'incubation: 36 h, 37 °C L'isoelement a-t-il été correctement réalisé? Rappel: isoler consiste à séparer les micro-organismes à la surface d'un milieu nutritif gélifié, de manière à ce que, après culture, on obtienne des colonies bien distinctes L'isolement permet-il de valider la pureté de la suspension préparée en jour 1? Observer minutieusement... Rappels: - si oui, la galerie d'orientation est validée et interprétable - si non, les résultats de la galerie ne sont pas interprétables (et donnés sous réserver, le temps de refaire la manipulation) Quelles caractères culturaux peut-on indiquer?
La souche inconnue est comparée à des espèces déjà décrites (souches-types) et le nom de l'espèce la plus similaire est proposé. Souche: c'est une population d'organismes descendant d'un organisme unique ou d'un isolat de culture pure. Au sein d'une même espèce les souches peuvent présenter des différences légères entre elles qui pourront être caractérisées sur la base: de leurs propriétés biochimiques ou physiologiques pour les biovars; de leurs propriétés antigéniques pour les sérovars; de leur facteur de virulence pour les pathovars. Voie d attaque du glucose pour. 4 ème partie: plan d'étude de la procédure opératoire d'orientation A partir des indications apportées dans le support d'activité (fiches techniques, chronologie des opérations), un plan d'étude est réalisé afin - de bien visualiser l'ensemble des instruments et milieux à mettre en place sur la paillasse - de ne pas perdre de temps 5 ème partie: lecture des tests effectués 1. Observations microscopiques Résultats obtenus: - souche 1: observation de bâtonnets roses, se déplaçant rapidement.
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